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在宣布研發EOS R3全畫幅無反相機同時，佳能同步發布了RF100mm F2.8 L MACRO IS USM新微距鏡頭，它放大率提高至1.4X。

佳能RF100mm F2.8 L MACRO IS USM由13組17片鏡片組成，當中不含特殊鏡片，最大光圈為F2.8、最小光圈為F32；內置了雙NANO USM超聲波馬達，最近對焦距離為0.26米，放大率達到了1.4X；支持光學防抖，在EOS R、RP相機防抖效果為5檔，在EOS R5、R6相機能夠實現聯動防抖，將防抖效果提升至8檔；鏡頭大小為約Φ81.5×148mm，重量730g。

相比EF卡口百微，無需增倍鏡實現1.4X放大率只是RF卡口百微一項改進，它還抑制了呼吸效應并加入了SA（球面像差）控制環，用戶可以通過旋轉SA控制環改變鏡頭的球面像差，營造出不同的焦外虛化效果——可以是奶油般化開，也可以產生肥皂般的焦外光斑。不過要注意的是，在0.26對焦距離（即最大放大率）下，SA控制會失去作用，鏡頭球面像差被限制在一個較小的范圍內（光圈大小會影響球面像差）。

為了更好適配RF100mm F2.8 L MACRO IS USM使用環境，鏡頭具備防水滴防塵構造以及使用了防污氟鍍膜，可選配佳能三腳架座 E（B），兼容微距佳能原廠環形閃光燈MR-14EX II或微距雙燈頭閃光燈MT-26EX-RT。

RF100mm F2.8 L MACRO IS USM和同時發布的RF400mm F2.8 L IS USM、RF600mm F4 L IS USM兩支焊馬鏡頭一樣，預計在2021年7月上市銷售，